Cultivo de bacterias y sensibilidad a los antibióticos

Unidad Educativa Gonzales Suarez

Biología

Tema: Cultivo de bacterias y sensibilidad a los antibióticos

Nombre: Kevin Iván Díaz Solís

Curso: 3 BGU C

Fecha: 05/04/2019

2018-2019

I INTRODUCCION

El cultivo de bacterias es crear un agar o ambiente nutritivo para que crezcan bacterias, las bacterias serán puestas a prueba de medicamentos para comprobar su sensibilidad a los mismos.

Es importante porque como parte de la materia de Biología debemos no solo conocer de las bacterias y sus reacciones sino también verlas y experimentar las mismas.

Es interesante porque por primera vez podremos usar los elementos del laboratorio y podremos observar bacterias y otros microorganismos que se encuentran en el entorno así como ver su reacción a diversos ambientes y procesos, aumentando nuestros conocimientos sobre las bacterias.

Este experimento va dirigido a los estudiantes para que se familiaricen con el laboratorio, hagan prácticas y muestren su gusto por trabajar con este tipo de instrumentos Y en algunos casos mostrando la pasión por la misma e inspirando a estudiar biología

II OBJETIVOS

Objetivo General

El objetivo General es Probar la sensibilidad a los antibióticos de  Bacterias cultivadas en el laboratorio.

Objetivos Específicos

Familiar a los estudiantes con el manejo de instrumentos de laboratorio.

Construir un medio de cultivo para el desarrollo de microorganismos.

III MARCO TEORICO

Agar MacConkey

Es un medio de cultivo selectivo y diferencial utilizado para la recuperación de enterobacterias y bacilos Gram negativos entéricos relacionados. Contiene sales biliares y cristal violeta que inhiben el desarrollo de bacterias .Gram positivas y de algunas Gram negativas exigentes. La lactosa es la única fuente de carbono. El indicador es el rojo neutro. Las bacterias fermentadoras de lactosa formas colonias de diferentes tonos de rojo. Los fermentadores fuertes de lactosa pueden provocar la precipitación de las sales biliares por la gran cantidad de ácidos formados, lo que se observa fácilmente en el medio por la aparición de zonas opacas alrededor de las colonias. Las bacterias que no fermentan la lactosa forman colonias incoloras o transparentes. (Anderson, 2012).

Agar de Sangre

Contiene sangre de mamíferos a una concentración de5 a 10 %. Es un medio enriquecido, diferencial usado para aislar microorganismos fastidiosos y detectar actividad hemolítica. La β-hemolisis se manifiesta como una lisis y digestión completa de los eritrocitos que rodean la colonia. La α-hemolisis aparece solo como lisis parcial, la hemoglobina aparece como un halo verdoso alrededor de la colonia. Contiene extracto de carne, triptona, cloruro de Sodio y agar. (Anderson, 2012).

Agar Casero

El agar nutritivo es un medio de cultivo usado normalmente como rutina para todo tipo de bacteria. Es una Caja Petri que contiene un medio de cultivo , se lo puede hacer usando Agua hervida, Gelatina y azúcar. Es muy útil porque permanece sólido incluso a relativamente altas temperaturas. Usado para cultivar microorganismos o pequeñas plantas, el crecimiento bacteriano en este agar lo hace en la superficie, se distinguen mejor las colonias pequeñas. (Anderson, 2012).

Sensibilidad de los antibióticos las bacterias

Un antibiótico es una sustancia Química producida por un microorganismo o sintéticamente en un laboratorio  capaz de inhibir el desarrollo de otros microorganismos, actúan de inmunomodulantes. Muchas bacterias y algunos hongos presentan resistencia a os agentes antimicrobianos y algunos virus han desarrollado resistencia a agentes antivirales.

No se puede proporcionar resultados de la eficacia del antibiótico con cultivos mixtos, sino con cultivos puros. El bactericida ejerce acción letal e irreversible sobre el microbio, mientras los antibióticos bacteriostáticos inhiben el crecimiento pero no matan a los microorganismos

La sensibilidad de una bacteria se mide con el antibiograma, se realiza cuando una toma bacteriana de finalidad diagnostica haya permitido el aislamiento de una bacteria responsable de la infección (medic.med 2016)

Técnicas de laboratorio para medios de cultivo

El medio de cultivo constituye el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento de los microorganismos. La composición precisa dependerá de la especie que se quiera cultivar, porque las necesidades nutricionales varían considerablemente.  Hay microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en medios de laboratorio normales  y microorganismos muy exigentes que necesitan determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer.

Existen medios cuya composición permite el crecimiento de:

 Un gran número de especies (agar nutritivo, caldo ordinario, agar de Sabouraud), determinados microorganismos (impidiendo el desarrollo de otros), son los denominados medios selectivos.

Otros en cambio, se desarrollan para el estudio de determinadas pruebas fisiológicas o test bioquímicos (utilización de citratos, acidificación a partir de azúcares, etc.).

Los medios de cultivo poseen una serie de componentes:

Indispensables: Entre los primeros se incluye el agua, nutrientes orgánicos (hidratos de carbono, aminoácidos, vitaminas, etc.) y nutrientes inorgánicos (P, Fe, N, Mg, S, etc.)

Alternativos: sustancias isosmotizantes (NaCl), agente solidifícate (agar-agar), tampones, indicador de pH, etc.

Durante las prácticas se van a manejar medios de cultivo de composición muy variada y de tres tipos diferentes en cuanto a consistencia: medios sólidos, semisólidos y líquidos. Este último aspecto es importante a la hora de la preparación de los mismos. Aunque los medios artificiales o sintéticos se pueden preparar a partir de sus componentes individuales, se pueden adquirir comercialmente como medios deshidratados a los que solamente hay que añadir la cantidad de agua necesaria. El fabricante indica la composición, la caducidad,  y la cantidad que debe pesarse por cada litro a preparar e incluso como debe esterilizarse.

3.  Hacer un primer acercamiento a la manipulación de microorganismos. Adquirir la idea de la importancia del trabajo en condiciones de esterilidad y las técnicas más comunes para realizarlo.

Disolver los componentes del medio en agua destilada. En muchos casos se parte de un preparado comercial con todos los componentes deshidratados. Siguiendo las instrucciones del fabricante o del profesor, añadir la cantidad de agua adecuada para conseguir la concentración deseada de los mismos. Si el medio contiene un agente solidifícate (agar-agar) hay que calentar el preparado hasta la ebullición del mismo agitando de vez en cuando, para asegurar una completa disolución del agar (medios sólidos y semisólidos); para medios líquidos no es necesario calentar, únicamente se agita la mezcla hasta la completa disolución de la misma.

Esterilizar la disolución.- Una vez disuelto el medio se debe esterilizar para evitar el crecimiento de contaminantes. Dependiendo de la forma en que vaya a utilizarse el medio, el procedimiento será diferente Medios sólidos en placa.- Tapar el matraz con tapón de algodón y cubrir con papel de aluminio. Llevar a esterilizar a la temperatura de 121 ªC durante 15-20 minutos. Una vez estéril repartir en placas de Petri estériles y dejar en reposo para que solidifique; Medios líquidos.- Una vez disueltos los componentes repartir en tubos a razón de unos 2-4 ml por tubo, tapar con tapón de aluminio y llevar a esterilizar en autoclave. (Mediamh 2011)

Ciclo celular de las bacterias

La fisión binaria bacteriana es similar en algunas formas a la mitosis que sucede en humanos y otros eucariontes. En ambos casos, los cromosomas se copian y se separan, y la célula divide su citoplasma para formar dos nuevas células. (P. H. 2015)

Sin embargo, los mecanismos y la secuencia de los dos procesos son bastante diferentes. Por un lado, en bacterias no se forma un huso mitótico. Quizás más importante, la replicación del ADN realmente sucede al mismo tiempo que la separación del ADN durante la fisión binaria (a diferencia de la mitosis, donde el ADN se copia durante la fase S, mucho antes de su separación en la fase M). (P. H. 2015)

 Un ciclo celular es una secuencia de acontecimientos interconectados que comienza con la formación de una nueva célula y termina cuando dicha célula se divide en otras dos hijas. Los ciclos celulares se describen generalmente atendiendo a una serie de eventos identificables que se van produciendo en una secuencia fija, de modo que para que se produzca cada uno de ellos hace falta que se complete el anterior. Los periodos del ciclo celular procariótico son:

	Fase c (equivalente a las eucarística): replicación del material genético cromosómico; se produce la replicación o síntesis del material genético, el material genético se duplica y queda formado por dos cromáticas idénticas. con la duplicación del material genético, el núcleo contiene el doble de proteínas nucleares y de material genético que al principio
	Fase d (equivalente a g2 + m): se distingue porque su terminación coincide con el final de división celular; que continúa la síntesis de proteínas y arn. al final de este período se observa al microscopio cambios en la estructura celular, que indican el principio de la división celular termina cuando la cromatina empieza a condensarse al inicio de la mitosis ,se divide en dos células hijas idénticas
	Fase innominada, (equivalente a la g1 eucarística). En la que existe crecimiento celular. Es el período que transcurre entre el fin de una mitosis y el inicio de la síntesis de material genético. ( URJ , 2012 )

  

IV MATERIALES

Cuaderno de apuntes, esfero, papel empaque, masking, rotulador o marcador, caja Petri, una funda de coconetes, 3 velas de un2 centímetros, un sobre de gelatina, una cuchara de madera o de metal, una olla pequeña ,3 placas porta objetos grandes, palillos de dientes, una tela térmica, una toalla, una caja, Japón líquido , azul de metileno

V PROCEDIMIENTOS

1) Colocar 2 tazas de agua en una olla, y poner a hervir.

2) Cuando hierva el agua colocar 2 sobres de gelatina y azúcar, mesclar con cuchara de metal.

3) Mecer hasta que se disuelva la gelatina, formando un agar casero

4) Traspasar el agar a la caja Petri, cerrar la caja Petri y dejarla que se entibie y endurezca

5) Pasando un día, con los coconetes tomad una muestra de saliva y esparcirla por todo el agar, al colocarla rodear el agar de velas para crear un ambiente estéril.

6) Colocad 2 pastillas antibióticos en el agar 

7) Cerrar con papel empaque y  guardar en una toalla para mantener la temperatura

8) Al pasar unos días, sacar la muestra

9) Sacar una muestra de las bacterias en el líquido con los palillos

10) Colocar la muestra en el Portaobjetos

11) Poner 2 gotas de azul de metileno

11) Esperar 5 minutos, Lavar el portaobjetos,

12) Dejar que seque

13) Observar con microscopio los resultados

  

VI RESULTADOS

Mi Agar fue todo un éxito, la gelatina y el azúcar crearon una masa perfectamente nutritiva, pero no hubo el cultivo de bacterias esperadas

El tamaño de las bacterias impide verlas a simple vista, sin embargo, se formó un halo alrededor de la pastilla ciproprosesina, y el otro antibiótico no ha crecido nada, la sensibilidad al antibiótico ha impedido que se reproduzcan en esa zona.

Se ha creado un montón de moho y con pocas bacterias debido a que no era un ambiente estéril, alrededor de las pastillas. En las demás cajas Petri hubo una enorme mancha roja, En mi caja Petri la mancha roja fue pequeña.

El moho no dejo suficiente espacio para desarrollarse otras bacterias.

Debido a falta de tiempo no se pudo usar el microscopio para observar la muestra después de aplicar azul de metileno.

VII CONCLUSIONES

*Las bacterias de la boca tienen sensibilidad hacia el antibiótico ciproprosesina

*Los estudiantes tienen un buen manejo de los instrumentos del laboratorio.

*El medio de cultivo sirve para nutrir tanto a bacterias de la boca como otros microorganismos presentes en el aire.

VIII RECOMENDACIONES

*Colocar las tabletas de antibióticos separadas y en los extremos del agar, para evitar que mesclen o no dejen espacio a las bacterias.

*Advertir a los estudiantes de no manipular los instrumentos del laboratorio sin aprobación ni supervisión de la docente encargada.

*Asegurarse de crear un ambiente estéril para evitar que se crezcan hongos en el medio de cultivo

IX BIBLIOGRAFIA 

Anónimo. (2016). Sensibilidad a los antibióticos. 06/04/2019, de medic.med Sitio web: http://medic.med.uth.tmc.edu/path/macconk.htm

Anderson, Cindy. (2012). MICROBIOLOGÍA CLÍNICA MEDIOS DE CULTIVO. 06/04/2019, de http://asignatura.us.es Sitio web: http://asignatura.us.es/mbclinica/docs/recursos/12/medios-de-cultivo.pdf

mediamh. (2011). Preparación de Medios de Cultivo. 06/04/2019, de mediamh Sitio web: https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-microbiologia/indice/preparacion-de-medios-de-cultivo

Raven, P. H. (2015). Fisión binaria bacteriana. 06/04/2019, de Khan Academy Sitio web: https://es.khanacademy.org/science/biology/cellular-molecular-biology/mitosis/a/bacterial-binary-fission

urg. (2012). Ciclo celular y crecimiento. 06/04/2019, de UGR Sitio web: https://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/12crecimiento.htm

X ANEXOS