Unidad Educativa Gonzales Suarez Biología
Tema: Cultivo de bacterias y sensibilidad a los antibióticos
Nombre: Kevin Iván Díaz Solís
Curso: 3 BGU C
Fecha: 05/04/2019
2018-2019
I
INTRODUCCION
El cultivo
de bacterias es crear un agar o ambiente nutritivo para que crezcan bacterias,
las bacterias serán puestas a prueba de medicamentos para comprobar su
sensibilidad a los mismos.
Es
importante porque como parte de la materia de Biología debemos no solo conocer
de las bacterias y sus reacciones sino también verlas y experimentar las
mismas.
Es
interesante porque por primera vez podremos usar los elementos del laboratorio
y podremos observar bacterias y otros microorganismos que se encuentran en el entorno
así como ver su reacción a diversos ambientes y procesos, aumentando nuestros
conocimientos sobre las bacterias.
Este
experimento va dirigido a los estudiantes para que se familiaricen con el
laboratorio, hagan prácticas y muestren su gusto por trabajar con este tipo de instrumentos
Y en algunos casos mostrando la pasión por la misma e inspirando a estudiar
biología
II
OBJETIVOS
Objetivo
General
El objetivo
General es Probar la sensibilidad a los antibióticos de Bacterias cultivadas en el laboratorio.
Objetivos Específicos
Familiar a los
estudiantes con el manejo de instrumentos de laboratorio.
Construir un medio de
cultivo para el desarrollo de microorganismos.
III
MARCO TEORICO
Agar
MacConkey
Es un medio de cultivo selectivo y diferencial
utilizado para la recuperación de enterobacterias y bacilos Gram negativos
entéricos relacionados. Contiene sales biliares y cristal violeta que inhiben
el desarrollo de bacterias .Gram positivas y de algunas Gram negativas
exigentes. La lactosa es la única fuente de carbono. El indicador es el rojo
neutro. Las bacterias fermentadoras de lactosa formas colonias de diferentes
tonos de rojo. Los fermentadores fuertes de lactosa pueden provocar la
precipitación de las sales biliares por la gran cantidad de ácidos formados, lo
que se observa fácilmente en el medio por la aparición de zonas opacas
alrededor de las colonias. Las bacterias que no fermentan la lactosa forman
colonias incoloras o transparentes. (Anderson, 2012).
Agar
de Sangre
Contiene sangre de mamíferos a una
concentración de5 a 10 %. Es un medio enriquecido, diferencial usado para
aislar microorganismos fastidiosos y detectar actividad hemolítica. La
β-hemolisis se manifiesta como una lisis y digestión completa de los eritrocitos
que rodean la colonia. La α-hemolisis aparece solo como lisis parcial, la
hemoglobina aparece como un halo verdoso alrededor de la colonia. Contiene
extracto de carne, triptona, cloruro de Sodio y agar. (Anderson,
2012).
Agar
Casero
El agar nutritivo es
un medio de cultivo usado normalmente como rutina
para todo tipo de bacteria.
Es una Caja Petri que contiene
un medio de cultivo , se lo puede hacer usando Agua hervida, Gelatina y azúcar.
Es muy útil porque permanece sólido incluso a relativamente altas temperaturas.
Usado para cultivar microorganismos o pequeñas plantas, el crecimiento
bacteriano en este agar lo hace en la superficie, se
distinguen mejor las colonias pequeñas. (Anderson, 2012).
Sensibilidad
de los antibióticos las bacterias
Un antibiótico es una sustancia
Química producida por un microorganismo o sintéticamente en un laboratorio capaz de inhibir el desarrollo de otros
microorganismos, actúan de inmunomodulantes. Muchas bacterias y algunos hongos
presentan resistencia a os agentes antimicrobianos y algunos virus han
desarrollado resistencia a agentes antivirales.
No se puede proporcionar resultados
de la eficacia del antibiótico con cultivos mixtos, sino con cultivos puros. El
bactericida ejerce acción letal e irreversible sobre el microbio, mientras los
antibióticos bacteriostáticos inhiben el crecimiento pero no matan a los
microorganismos
La sensibilidad de una bacteria se
mide con el antibiograma, se realiza cuando una toma bacteriana de finalidad
diagnostica haya permitido el aislamiento de una bacteria responsable de la infección
(medic.med 2016)
Técnicas
de laboratorio para medios de cultivo
El medio de cultivo constituye el
aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento de los microorganismos.
La composición precisa dependerá de la especie que se quiera cultivar, porque
las necesidades nutricionales varían considerablemente. Hay microorganismos muy poco exigentes que
crecen bien en medios de laboratorio normales
y microorganismos muy exigentes que necesitan determinadas sustancias
como vitaminas, suero o sangre para crecer.
Existen medios cuya composición
permite el crecimiento de:
Un gran número de especies (agar nutritivo,
caldo ordinario, agar de Sabouraud), determinados microorganismos (impidiendo
el desarrollo de otros), son los denominados medios selectivos.
Otros en cambio, se desarrollan
para el estudio de determinadas pruebas fisiológicas o test bioquímicos
(utilización de citratos, acidificación a partir de azúcares, etc.).
Los medios de cultivo poseen una
serie de componentes:
Indispensables: Entre los primeros
se incluye el agua, nutrientes orgánicos (hidratos de carbono, aminoácidos,
vitaminas, etc.) y nutrientes inorgánicos (P, Fe, N, Mg, S, etc.)
Alternativos: sustancias
isosmotizantes (NaCl), agente solidifícate (agar-agar), tampones, indicador de
pH, etc.
Durante las prácticas se van a
manejar medios de cultivo de composición muy variada y de tres tipos diferentes
en cuanto a consistencia: medios sólidos, semisólidos y líquidos. Este último
aspecto es importante a la hora de la preparación de los mismos. Aunque los
medios artificiales o sintéticos se pueden preparar a partir de sus componentes
individuales, se pueden adquirir comercialmente como medios deshidratados a los
que solamente hay que añadir la cantidad de agua necesaria. El fabricante
indica la composición, la caducidad, y
la cantidad que debe pesarse por cada litro a preparar e incluso como debe
esterilizarse.
3.
Hacer un primer acercamiento a la manipulación de microorganismos.
Adquirir la idea de la importancia del trabajo en condiciones de esterilidad y
las técnicas más comunes para realizarlo.
Disolver los componentes del medio
en agua destilada. En muchos casos se parte de un preparado comercial con todos
los componentes deshidratados. Siguiendo las instrucciones del fabricante o del
profesor, añadir la cantidad de agua adecuada para conseguir la concentración
deseada de los mismos. Si el medio contiene un agente solidifícate (agar-agar)
hay que calentar el preparado hasta la ebullición del mismo agitando de vez en
cuando, para asegurar una completa disolución del agar (medios sólidos y
semisólidos); para medios líquidos no es necesario calentar, únicamente se
agita la mezcla hasta la completa disolución de la misma.
Esterilizar la disolución.- Una vez
disuelto el medio se debe esterilizar para evitar el crecimiento de
contaminantes. Dependiendo de la forma en que vaya a utilizarse el medio, el
procedimiento será diferente Medios sólidos en placa.- Tapar el matraz con
tapón de algodón y cubrir con papel de aluminio. Llevar a esterilizar a la temperatura
de 121 ªC durante 15-20 minutos. Una vez estéril repartir en placas de Petri
estériles y dejar en reposo para que solidifique; Medios líquidos.- Una vez
disueltos los componentes repartir en tubos a razón de unos 2-4 ml por tubo,
tapar con tapón de aluminio y llevar a esterilizar en autoclave. (Mediamh 2011)
Ciclo
celular de las bacterias
La fisión binaria bacteriana es similar en algunas formas a
la mitosis que sucede en humanos y otros eucariontes. En ambos casos,
los cromosomas se copian y se separan, y la célula divide su citoplasma para
formar dos nuevas células. (P. H. 2015)
Sin embargo, los mecanismos y la secuencia de los dos procesos
son bastante diferentes. Por un lado, en bacterias no se forma un huso
mitótico. Quizás más importante, la replicación del ADN realmente sucede al
mismo tiempo que la separación del ADN durante la fisión binaria (a diferencia
de la mitosis, donde el ADN se copia durante la fase S, mucho antes de su
separación en la fase M). (P. H. 2015)
Un ciclo celular es una
secuencia de acontecimientos interconectados que comienza con la formación de
una nueva célula y termina cuando dicha célula se divide en otras dos hijas. Los
ciclos celulares se describen generalmente atendiendo a una serie
de eventos identificables que se van produciendo en una
secuencia fija, de modo que para que se produzca cada uno de ellos hace
falta que se complete el anterior. Los periodos del ciclo celular procariótico
son:
Fase c (equivalente a las eucarística):
replicación del material genético cromosómico; se produce la replicación o síntesis del
material genético, el
material genético se duplica y queda formado por dos cromáticas idénticas.
con la duplicación del material genético, el núcleo contiene el doble de proteínas nucleares y
de material genético que al principio
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Fase d (equivalente a g2 +
m): se distingue porque su terminación coincide con el final de división
celular; que continúa la síntesis de
proteínas y arn. al final de este período se observa al microscopio cambios
en la estructura celular, que indican el principio de la división celular
termina cuando la cromatina empieza a condensarse al inicio de la mitosis ,se
divide en dos células hijas idénticas
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Fase innominada, (equivalente a
la g1 eucarística). En la que existe crecimiento celular. Es el período que transcurre
entre el fin de una mitosis y el inicio de la síntesis de material genético.
( URJ , 2012 )
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IV
MATERIALES
Cuaderno de apuntes, esfero, papel
empaque, masking, rotulador o marcador, caja Petri, una funda de coconetes, 3
velas de un2 centímetros, un sobre de gelatina, una cuchara de madera o de metal,
una olla pequeña ,3 placas porta objetos grandes, palillos de dientes, una tela
térmica, una toalla, una caja, Japón líquido , azul de metileno
V
PROCEDIMIENTOS
1) Colocar 2 tazas de agua en una olla,
y poner a hervir.
2) Cuando hierva el agua colocar 2
sobres de gelatina y azúcar, mesclar con cuchara de metal.
3) Mecer hasta que se disuelva la gelatina,
formando un agar casero
4) Traspasar el agar a la caja Petri,
cerrar la caja Petri y dejarla que se entibie y endurezca
5) Pasando un día, con los coconetes
tomad una muestra de saliva y esparcirla por todo el agar, al colocarla rodear
el agar de velas para crear un ambiente estéril.
6) Colocad 2 pastillas antibióticos
en el agar
7) Cerrar con papel empaque y guardar en una toalla para mantener la
temperatura
8) Al pasar unos días, sacar la
muestra
9) Sacar una muestra de las
bacterias en el líquido con los palillos
10) Colocar la muestra en el
Portaobjetos
11) Poner 2 gotas de azul de
metileno
11) Esperar 5 minutos, Lavar el
portaobjetos,
12) Dejar que seque
13) Observar con microscopio los
resultados
VI
RESULTADOS
Mi Agar fue
todo un éxito, la gelatina y el azúcar crearon una masa perfectamente
nutritiva, pero no hubo el cultivo de bacterias esperadas
El tamaño de
las bacterias impide verlas a simple vista, sin embargo, se formó un halo
alrededor de la pastilla ciproprosesina, y el otro antibiótico no ha crecido nada, la sensibilidad
al antibiótico ha impedido que se reproduzcan en esa zona.
Se ha creado un montón de moho y
con pocas bacterias debido a que no era un ambiente estéril, alrededor de las
pastillas. En las demás cajas Petri hubo una enorme mancha roja, En mi caja
Petri la mancha roja fue pequeña.
El moho no dejo suficiente espacio
para desarrollarse otras bacterias.
Debido a falta de tiempo no se pudo
usar el microscopio para observar la muestra después de aplicar azul de metileno.
VII
CONCLUSIONES
*Las bacterias de la boca tienen
sensibilidad hacia el antibiótico ciproprosesina
*Los estudiantes tienen un buen manejo de los instrumentos del laboratorio.
*El medio de cultivo
sirve para nutrir tanto a bacterias de la boca como otros microorganismos
presentes en el aire.
VIII
RECOMENDACIONES
*Colocar las tabletas de
antibióticos separadas y en los extremos del agar, para evitar que mesclen o no
dejen espacio a las bacterias.
*Advertir a los estudiantes de no
manipular los instrumentos del laboratorio sin aprobación ni supervisión de la
docente encargada.
*Asegurarse de crear un ambiente estéril
para evitar que se crezcan hongos en el medio de cultivo
IX
BIBLIOGRAFIA
Anónimo. (2016).
Sensibilidad a los antibióticos. 06/04/2019, de medic.med Sitio web:
http://medic.med.uth.tmc.edu/path/macconk.htm
Anderson, Cindy.
(2012). MICROBIOLOGÍA CLÍNICA MEDIOS DE CULTIVO. 06/04/2019, de
http://asignatura.us.es Sitio web:
http://asignatura.us.es/mbclinica/docs/recursos/12/medios-de-cultivo.pdf
mediamh. (2011).
Preparación de Medios de Cultivo. 06/04/2019, de mediamh Sitio web: https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-microbiologia/indice/preparacion-de-medios-de-cultivo
Raven, P. H. (2015). Fisión binaria
bacteriana. 06/04/2019, de Khan Academy Sitio web: https://es.khanacademy.org/science/biology/cellular-molecular-biology/mitosis/a/bacterial-binary-fission
urg. (2012). Ciclo celular y crecimiento. 06/04/2019,
de UGR Sitio web: https://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/12crecimiento.htm
X
ANEXOS
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